Indukowana przez gentamycynę korekcja funkcji CFTR u pacjentów z mukowiscydozą i mutacjami stopu CFTR ad 7

Oceniono różnicę potencjałów w nosie i komórki nabłonka nosa uzyskano przed i po leczeniu gentamycyną. Wykrywanie białka CFTR o pełnej długości przeprowadzono w sposób zaślepiony. Figura 4. Figura 4. Przykład immunobarwienia dla transmembranowego regulatora kondukcji włóknistej (CFTR) w kontroli negatywnej obejmującego mimowolne IgM CFTR dla myszy (panel A) i u pacjenta z mutacją W1282X / .F508 przed (Panel B) i po (Panel C) Leczenie gentamycyną (x 100). Komórki CFTR-dodatnie mają obwodowy i powierzchniowy wzór barwienia po traktowaniu gentamycyną.
Przed leczeniem gentamycyną barwienie było głównie okołojądrowe, z tylko 4 procentami komórek wykazujących wybarwianie w komórkach i minimalnym wybarwianiem powierzchni w niektórych komórkach (Figura 4B). Ponieważ pacjenci byli heterozygotyczni pod względem mutacji .F508, ten wzór barwienia okołojądrowego jest zgodny z endoplazmatyczną siatkowatą lokalizacją białek CFTR niosących mutację .F508. Po leczeniu gentamycyną nastąpiła znaczna (P <0,01) zmiana w wzorze zabarwienia w kierunku obwodowego i powierzchniowego wzoru (Figura 4C). Ten wzór był podobny do obserwowanego u osób kontrolnych. Wyniki te wskazują na indukowaną przez gentamycynę supresję mutacji nonsensownych, prowadzącą do wytworzenia pełnej długości CFTR i są one zgodne z pomiarami potencjalnej różnicy wykazującej poprawę w transporcie chlorków u tych pacjentów.
Dyskusja
W tym podwójnie ślepym, kontrolowanym placebo badaniu krzyżowym stwierdziliśmy, że podanie gentamycyny do nabłonka nosa powoduje przywrócenie funkcji CFTR u około 90 procent pacjentów z mukowiscydozą, którzy przerwali mutacje w CFTR. Po leczeniu gentamycyną zaburzenia elektrofizjologiczne spowodowane defektem CFTR ustąpiły u 21% pacjentów, a transport chlorku lub sodu został przywrócony w 68%. Wydaje się, że gentamycyna jest bardziej skuteczna u pacjentów homozygotycznych pod względem mutacji typu stop niż u osób heterozygotycznych. Ponadto, barwienie komórek przeciwciałem przeciw CFTR, które rozpoznaje region w CFTR poza mutacją W1282X, wykazało wzrost liczby komórek z zabarwieniem powierzchniowym, wskazując na dostarczenie białek CFTR pełnej długości do błony wierzchołkowej. Wyniki te dostarczają bezpośrednich dowodów, że leczenie gentamycyną pacjentów z mukowiscydozą i mutacją opornościową W1282X może indukować syntezę pełnej długości CFTR.
Ta korekta nieprawidłowej różnicy potencjałów i pojawienie się pełnej długości CFTR na powierzchni komórki potwierdza wyniki poprzednich badań, które pokazały, że gentamycyna może promować odczytywanie mutacji stop. Dwóch pacjentów z mutacjami stop nie miało odpowiedzi na gentamycynę. Przyczyna tego braku odpowiedzi jest nieznana. Może to wynikać z nieefektywnego wychwytu lub dystrybucji gentamycyny u tych pacjentów. Jednak może istnieć molekularne wyjaśnienie tego braku odpowiedzi, obejmujące mechanizm tłumienia nonsenowego kodonu przez gentamycynę. Ten złożony mechanizm supresji wymaga, aby aminoglikozyd związał się z centrum dekodowania rybosomalnego RNA podczas translacji nonsensownych transkryptów
[przypisy: wyszukiwarka leków, oddział leczenia alkoholowych zespołów abstynencyjnych, espumisan przed usg ]
[podobne: tramal ulotka, wyszukiwarka leków, lek bez recepty na trądzik ]