Transformowanie czynników wzrostu 1 i w przewlekłych chorobach wątroby w wyniku terapii interferonem Alfa cd

Tę dawkę podawano aż do obniżenia poziomów ALT w surowicy do poniżej 50 U na litr i pozostało w tym stężeniu przez okres dwóch tygodni lub przez dwa miesiące, jeśli poziom ALT w surowicy nie spadł poniżej 50 U na litr. Pod koniec fazy indukcji siedmiu z ośmiu pacjentów miało poziomy ALT w surowicy w normalnym zakresie. Faza konserwacji
Wszystkich ośmiu pacjentów (w tym pacjent, którzy nie zareagowali na leczenie w fazie indukcji) leczono 3 milionami jednostek interferonu trzy razy w tygodniu przez 3 miesiące, a następnie dawki 1,5 miliona jednostek trzy razy w tygodniu, w sumie 12 miesięcy leczenia (fazy indukcji i konserwacji).
Podczas jednorocznego okresu leczenia sześciu z ośmiu pacjentów miało prawidłowy poziom ALT w surowicy. U jednego pacjenta wystąpiła przemijająca odpowiedź (normalne poziomy ALT w surowicy przez kilka miesięcy, a następnie reaktywacja choroby wątroby i nieprawidłowe poziomy AlAT). Pacjent, który nie miał odpowiedzi na interferon podczas fazy indukcji, również nie miał odpowiedzi (bez zmiany poziomu ALT w surowicy) podczas pozostałej części okresu leczenia.
Ekstrakcja RNA i analiza Northern Blot
RNA wyizolowano z zamrożonej tkanki wątroby zgodnie z procedurą Chirgwina [8, 31, 33] Próbki wątroby homogenizowano w 4 M roztworze tiocyjanianu guanidyny. Po wirowaniu przy niskiej prędkości w celu usunięcia resztek komórkowych, próbki nałożono warstwami na 3,5-ml poduszkę z 5,7 M chlorku cezu w 25 mM octanie sodu (pH 5). Następnie wirowano je przez 20 godzin przy 20 000 rpm w rotorze Beckman SW40 Ti. RNA rozpuszczono w wodzie i odzyskano przez strącanie etanolem. Zawartość RNA mierzono spektrofotometrycznie (absorbancja przy 260 rano}.
Próbki RNA (10 .g na ścieżkę) frakcjonowano za pomocą elektroforezy w żelu agarozowym o zawartości 6,2% formaldehydu-1,1% i przenoszono do filtrów nitrocelulozowych w 20 x SSC (1 x SSC to 0,15 M chlorek sodu-0,015 M cytrynian trisodowy). Aby zapewnić, że podobne ilości RNA zostały załadowane na różne ścieżki żelu, ilość 18S i 28S RNA określono przez barwienie fluorescencyjne bromkiem etydyny przed transferem RNA. Następnie bloty hybrydyzowano w temperaturze 42 ° C przez 72 godziny z komplementarnymi sondami DNA znakowanymi 32P dla ludzkiego TGF.1,8 ludzkiego TGF. (fragment EcoRI dla ludzkiej Prero-TGF. o wielkości 925 pz, dostarczonego przez Dr. GI Bell), ludzką .1 (I). ) prokolagen34 (klon Hf677, dostarczony przez Dr. K. Zareta), mysi gen histonowy H3 (fragment SalI-BamHI 204-bp z histonu 3.2, dostarczony przez Dr. L. Biempica) i szczurzy dehydrogenaza gliceraldehydo-3-fosforanowa35, 36 (dostarczone przez dr R. Wu). Wszystkie sondy zostały oznakowane przez nick. 8 Po przemyciu w temperaturze 50 ° C, filtry wystawiono na działanie filmu Kodak XAR-2 w -70 ° C z ekranami intensyfikującymi. Autoradiografy oznaczono ilościowo metodą densytometrii skaningowej za pomocą spektrofotometru Gilforda. Ekspresję mRNA .1 (I) prokolagenu określono tylko u 34 pacjentów z powodu problemów technicznych z procedurą hybrydyzacji w jednym z filtrów.
Ekspresję mRNA dehydrogenazy gliceraldehydo-3-fosforanowej zastosowano jako kontrolę wewnętrzną dla każdej próbki. Zawartość mRNA TGF.1 (absorbancja densytometrii po 96 godzinach ekspozycji na autoradiografię), mRNA TGF. (192 godziny ekspozycji), mRNA prokolagenu I (24 godziny ekspozycji) i mRNA H3 histonu (192 godziny ekspozycji) znormalizowano do zawartości mRNA dehydrogenazy gliceraldehydo-3-fosforanowej (2 godziny ekspozycji) w tej samej próbce biopsyjnej.
Amino-Terminal Peptyd Procollagen Typ III
Peptyd końcowy na końcu aminowym prokolagenu III został zmierzony za pomocą komercyjnego zestawu do radioimmunologii (RIA-gnost P-III-P; Behringwerke AG, Marburg, Niemcy).
[podobne: otręby ryżowe, opokan keto, biofazolin ]